Diabetologia：激活但功能受到影响的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现肝细胞会自身抗本体到经常出现1型号冠心病病理病因的成效率在老年人中期就有很好的叙述，多个肝细胞会自身抗本体乙型号肝炎的老年人里面有70%在血清匹配后10年内患上冠心病，而随访15年的老年人这一比率减小到84%。相比较之下，占多数病理1型号冠心病一半以上的型号1型号冠心病的病症的系统还没有给予更进一步的数据分析。

越来越多的人开始运用于仍须系统来定义1型号冠心病的成效：个本体在经常出现多种肝细胞会自身抗本体时踏入第1先决条件，经常出现皮质醇异常时踏入第2先决条件，经常出现病因时踏入第3先决条件。一些多发肝细胞会自身抗本体乙型号肝炎的个本体，在1期和2期，成效较慢，并发展为病症的1型号冠心病。我们早先叙述了一四组在首次扫描到多种肝细胞会自身抗本体采样后至少10年无冠心病的以致于慢成效者，这四组病人人数少，但特点极其确实。随后，我们发现肝细胞会自身肝细胞抗本体CD8+T细胞会中间体该在成效以致于快的病人里面必需不长期存在，但在现先决条件病症和长期长期存在的冠心病病人里面很容易扫描到。这可能会暗示，与成效病人相比较，这些病人自身特异性的调控增强。

早期数据分析暗示，尽管调控性T细胞会(Treg)数量长时间，但冠心病病人长期存在一些功能性不足之处，其里面包括对IL-2的中间体该能力减小。此外，冠心病病人里面的不稳定性CD4+T细胞会可能会对调控愈来愈具抵抗性，表现为不稳定性T细胞会的依赖性逼近，连续性激发的Treg和本体外激发的诱导Treg，以及肝细胞历程的CD4+T细胞会里面IL-2中间体该逼近。本数据分析的目的是叙述了CD4+调控性T细胞会(Treg)在一小群以致于以致于快成效者里面的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX数据分析是一项以人群为基础的纵向数据分析，在21岁所列出院的病人亲属里面检查1型号冠心病的险恶主因。我们早先叙述了长期以致于快成效者的特点，他们保持多重肝细胞会自身抗本体乙型号肝炎少于10年，但没有经常出现冠心病的病理病因，慢性或非顺利癫痫自身免疫。随后，10名继续保持无冠心病并想要提供大量血液采样的以致于快成效者划入T和B细胞会功能性数据分析。在目前的数据分析里面，8名慢成效者(SP四组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的肝细胞会自身抗本体乙型号肝炎。所有的举例来说都东南面1型号冠心病成效的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞会自身抗本体对某些肝细胞的乙型号肝炎中间体该，然而，一名病人已经东南面2期至少6年，但没有经常出现病理病因，一名病人被诊断为冠心病，该受试者72岁，在采集物理采样时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析里面对该供本体顺利进行了单独化验。剥离外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多表达式流式细胞会术和T细胞会依赖性试验化验供本体里面Treg的频带、遗传基因号和功能性。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类化验、连续性和重回)顺利进行无委派聚类数据分析，化验Treg遗传基因号。

结果：与心理健康供本体相比较，来自慢成效本体的潜意识CD4+T细胞会的委派聚类结果显示，激光阴的潜意识CD4+ Treg频带减小，与阿托品诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表述减小有关。一名HbA1c升温的病人与成效以致于快者和匹配的对照四组相比较，Treg谱有所不同。功能性相比较较，与心理健康供本体相比较，来自以致于快成效本体的Treg特异性的CD4+不稳定性T细胞会依赖性突出受到影响。表现为对不稳定性CD4+T细胞会CD25和CD134表述的依赖性减小。

所示1 深入的遗传基因号数据分析结果显示，CD4+Treg亚型号在慢成效配置文件里面减小。由FlowSOM作用于的Treg二楼，聚集在来自所有供本体的光阴CD4+CD45RA -细胞会上。根据记号物表述化验出10个元簇:潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)运用于9个不同Treg记号作用于的10个元簇的MST。每个键值代表一个空降兵(100个空降兵)，愈来愈大的元空降兵(10个元空降兵)在键值四组周围制做。每个键值里面的粥所示坚称单个记号的表述级别。(b)每个元聚类的热所示，以结果显示整本体记号表述。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)作用于所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的孔洞。(e-l)相比较轻元素为每个metacluster装有示意所示(轻元素> 0.05%)确认为HD和SP四组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞会(l)。浅蓝色带子代表理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩化验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 运用于CITRUS的数据分析暗示号证实，Treg频带的减小是成效以致于快的标志。这两项除此以外(a - f)和棉花数据分析(g-k)比较SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的代表性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述顺利进行剥离，模拟FlowSOM社会性。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)四组以及供本体SP 606(浅蓝色)里面CD25+ cd127的频带摘要所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外偏序的装有示意所示;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)木瓜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述低压后处理，箭头突出的簇被识别为SP和HD配置文件二者之间的不同。(j)装有示意所示结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组里面，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相比较轻元素(比率)。(k)直方所示结果显示每个簇的遗传基因号(暗红色)和Treg记号相比较表述与剧中表述(白色);上列，内核Treg_3;下面一行，内核Treg_4。剧中与所有其他簇里面记号的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩化验

所示3 与心理健康献血者相比较，成效以致于快者潜意识treg的GITR减小。每个潜意识CD4+T细胞会元簇(潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个表述记号的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的表述热所示(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇里面所有HD(暗红色)、所有SP(白色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR表述串联，结果显示直方所示(c)和摘要所示(d)。Wilcoxon一对一符号秩和化验，p< 0.07(浅蓝色)所有供本体包括，p< 0.05(白色)供本体SP 606和匹配的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR表述，从这两项除此以外，从所有HD(暗红色)、所有SP(白色)和SP 606(浅蓝色)串联，结果显示直方所示(e)和摘要所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一符号秩化验

所示4 来自以致于快成效的CD4+ treg细胞会高度集中不稳定性CD4+T细胞会的能力减小。SP四组用白色的终点站和带子坚称，HD四组用暗红色的终点站和带子坚称，浅蓝色的终点站/带子坚称供本体sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被记号为CFSE, Treg按通过观察的比率指示剂。用抗CD3 /28微珠光阴化细胞会，培训3过后顺利进行流式细胞会术扫描。(a-d)与CD4+此番者相比较应该的treg培训(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培训。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE依赖性比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性比率。运用于乙型号肝炎对照(激光阴的作出反应该细胞会内含treg)计算依赖性比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 不稳定性CD4+T细胞会对以致于快成效的T细胞会光阴化的依赖性愈来愈敏感。SP四组用白色的终点站和带子坚称，HD四组用暗红色的终点站和带子坚称，浅蓝色的终点站/带子坚称供本体sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel记号，treg按通过观察的比率指示剂。用抗CD3 /28微珠光阴化细胞会，培训3过后顺利进行流式细胞会术(CD25反染)和细胞会因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培训。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE依赖性前年(b)。(c,d) CD25依赖性前年(c)和CD134依赖性前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训里面的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们得出的事实是，来自以致于快成效子的光阴化潜意识CD4+Treg在GITR表述里面给予了扩展和独特，强调了有利于数据分析Treg在1型号冠心病风险个本体里面的异质性的重要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28