Diabetologia：启动时但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失肝细胞自身血清到消失1HG肝炎针灸疼痛的方面部将在儿童时期就有很好的描述，多个肝细胞自身血清HIV的儿童中所有70%在血清叠加后10年内患上肝炎，而随访15年的儿童这一比部将增大到84%。相较之下，占总针灸1HG肝炎一半以上的HG1HG肝炎的复发机制还无法得到充分的研究成果。

越来越多的人开始用到分阶段系统来定义1HG肝炎的方面：个锥体在消失多种肝细胞自身血清时踏入第1下一阶段，消失血糖异常时踏入第2下一阶段，消失疼痛时踏入第3下一阶段。一些多发肝细胞自身血清HIV的个锥体，在1期和2期，方面却是快，并发展为复发的1HG肝炎。我们早先描述了一三组在首次检验到多种肝细胞自身血清样品后大概10年无肝炎的却是迟方面者，这三组高血压多人少，但特性非常明确。随后，我们找到肝细胞自身抗原酪氨酸CD8+T蛋白反应该在方面却是快的高血压中所基本不普遍存在，但在近期复发和长年普遍存在的肝炎高血压中所很容易检验到。这不太可能声称，与方面高血压相较，这些高血压诱发反应该的抑制增强。

早期研究成果声称，尽管抑制性T蛋白(Treg)用到量出现异常，但肝炎高血压普遍存在一些机能局限性，其中所包括对IL-2的反应该战斗能力降低。此外，肝炎高血压中所的现象CD4+T蛋白不太可能对抑制更具抵抗性，观感为现象T蛋白的可抑制减弱，自然产生的Treg和锥体外产生的可借Treg，以及抗原随之而来的CD4+T蛋白中所IL-2反应该减弱。本研究成果的目的是描述了CD4+抑制性T蛋白(Treg)在一小群却是却是快方面者中所的特性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁都有复发的高血压亲属中所检查1HG肝炎的危险主因。我们早先描述了长年却是快方面者的特性，他们持续保持多重肝细胞自身血清HIV超过10年，但无法消失肝炎的针灸疼痛，迟性或非来性虐待诱发。随后，10名一直持续保持无肝炎并乐意提供者大量肾脏样品的却是快方面者纳入T和B蛋白机能深入研究成果。在迄今的研究成果中所，8名迟方面者(SP三组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身血清HIV。所有的参与者都处于1HG肝炎方面的1期，尽管一些人随后无法控制了肝细胞自身血清对某些抗原的HIV反应该，然而，一名高血压之前处于2期大概6年，但无法消失针灸疼痛，一名高血压被诊断为肝炎，该受试者72岁，在采集实验样品时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究成果中所对该可借来进行了原则上评估。除去外周血单个核蛋白(PBMCs)，改用多值流式蛋白练成和T蛋白可抑制试制评估可借中所Treg的基频、表HG和机能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)来进行无监督聚类深入研究成果，评估Treg表HG。

结果：与身锥体健康可借相较，来自迟方面锥体的失忆CD4+T蛋白的监督聚类推测，激活的失忆CD4+ Treg基频增大，与糖皮质激素可借的TNFR相关蛋白(GITR)表达出来增大有关。一名HbA1c增高的高血压与方面却是快者和匹配的对照三组相较，Treg磬有所完全相同。机能深入研究成果声称，与身锥体健康可借相较，来自却是快方面锥体的Treg依赖性的CD4+现象T蛋白可抑制明显受损。观感为对现象CD4+T蛋白CD25和CD134表达出来的可抑制增大。

示意图1 深入的表HG深入研究成果推测，CD4+Treg亚HG在迟方面队列中所增大。由FlowSOM生成的Treg楼内，聚集在来自所有可借的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标有物表达出来鉴定出10个元簇:失忆T蛋白_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T蛋白;HLA-DR + GITR +失忆T蛋白;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用到9个完全相同Treg标有生成的10个元簇的MST。每个数据流代表一个集群(100个集群)，更多的元集群(10个元集群)在数据流三组周围上色。每个数据流中所的年糕示意图回应单个标有的表达出来高级别。(b)每个元聚类的热示意图，以推测整锥体标有表达出来。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)生成示意图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的基岩。(e-l)相对来说丰度为每个metacluster装入本站示意图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP三组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T蛋白(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T蛋白(l)。紫色橘色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推下标秩检查和。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用到CITRUS的预测模HG证实，Treg基频的增大是方面却是快的标志。国际标准离孙子通道(a - f)和甜菜深入研究成果(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T蛋白上的相异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的代表性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR表达出来来进行除去，模拟FlowSOM群锥体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)三组以及可借SP 606(紫色)中所CD25+ cd127的基频汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离孙子通道孙子集的装入本站示意图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来强度渐变，箭头突出的簇被辨别为SP和HD队列之间的完全相同。(j)装入本站示意图推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)三组中所，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相对来说丰度(比部将)。(k)数据集推测每个簇的表HG(白色)和Treg标有相对来说表达出来与背景表达出来(浅蓝色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中所标有的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推下标秩检查和

示意图3 与身锥体健康献血者相较，方面却是快者失忆treg的GITR增大。每个失忆CD4+T蛋白元簇(失忆T蛋白_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T蛋白;HLA-DR + GITR +失忆T蛋白;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个表达出来标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表达出来热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR表达出来串连，推测数据集(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon类推下标秩和检查和，p< 0.07(紫色)所有可借包括，p< 0.05(浅蓝色)可借SP 606和匹配的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR表达出来，从国际标准离孙子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(紫色)串连，推测数据集(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推下标秩检查和

示意图4 来自却是快方面的CD4+ treg蛋白控制现象CD4+T蛋白的战斗能力降低。SP三组用浅蓝色的本站和橘色回应，HD三组用粉红色的本站和橘色回应，紫色的本站/橘色回应可借sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白来进行分选。CD4+CD25−(应该答者)被标有为CFSE, Treg按观察的比部将溶液。用抗CD3 /28微珠活化蛋白，养成3天后来进行流式蛋白练成检验。(a-d)与CD4+应该答者相对来说应该的treg养成(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应该答者养成。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE可抑制比部将(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制比部将。用到HIV对照(激活的响应该蛋白不含treg)计算可抑制比部将。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究成果。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 现象CD4+T蛋白对却是快方面的T蛋白活化的可抑制更却是端。SP三组用浅蓝色的本站和橘色回应，HD三组用粉红色的本站和橘色回应，紫色的本站/橘色回应可借sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白来进行分选。CD4+CD25−(应该答者)被cfsel标有，treg按观察的比部将溶液。用抗CD3 /28微珠活化蛋白，养成3天后来进行流式蛋白练成(CD25反染)和蛋白因孙子深入研究成果。HD Treg与HD、SP或sp606应该答者共同养成。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE可抑制百份(b)。(c,d) CD25可抑制百份(c)和CD134可抑制百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成中所的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究成果。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自却是快方面孙子的活化失忆CD4+Treg在GITR表达出来中所得到了扩展和多样，阐释了进一步研究成果Treg在1HG肝炎风险个锥体中所的相异性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28